Saturs
Tuberkuloze ir infekcijas slimība, ko izraisa baktērija Mycobacterium tuberculosis, un tā ir elpošanas ceļu slimība, kurai raksturīgi bumbuļu veidojumi, nekroze, abscesi, fibroze un pārkaļķošanās plaušās. Tas var inficēt arī nieres, limfmezglus, kaulus, locītavas un ādu.
Šīs baciļas primārā laboratoriskā diagnostika ietver tās krāsošanu, lai mikroskopā vizualizētu baktērijas. Izvēles paraugs ir krēpu vai bronhoalveolu skalošana, lai identificētu elpceļu infekciju, vai faktisko audu paraugs.
Fizioloģija
Mycobacterium tuberculosis ir stieņa formas organisms (baciļi), kas nav kustīga, nav obligāta spora. Šīs baktērijas izmērs ir 0,4x3 mikrometri un ik pēc 15 līdz 24 stundām tiek veikta binārā šķelšanās (reproduktīvās šūnas dalīšanās), kas tiek uzskatīta par lēnu, salīdzinot ar citām baktērijām. Tādēļ mikobaktērijai var būt nepieciešamas līdz deviņām nedēļām, līdz tās parādās barotnē.
Šis organisms ir jutīgs pret UV gaismu un siltumu (piemēram, pasterizāciju), bet pretojas ķīmiskiem dezinfekcijas līdzekļiem.
Grama traips
Mycobacterium tuberculosis patiešām nevar klasificēt kā grampozitīvu vai gramnegatīvu. Šī klasifikācija tiek veikta, pamatojoties uz peptidoglikāna daudzumu baktērijas šūnas sieniņā. Grampozitīvām sugām ir biezs šīs molekulas slānis (apmēram 90%), savukārt gramnegatīvajām sugām ir plāns slānis (no 5% līdz 20%). Grama traipi iekļūst šūnas sienā un saistās ar tajā esošajiem ķīmiskajiem komponentiem. Zem mikroskopa iekrāsotās baktērijas kļūs violetas vai sārtas.
Ar mycobacterium tuberculosis šūnu siena sastāv no peptidoglikāna, bet arī sarežģītiem lipīdiem, kas kavē gramu krāsas iekļūšanu. Šūnu siena pretojas arī skābes vai spirta krāsas maiņai, tāpēc mikobaktēriju sauc par “izturīgu pret skābēm”. Šūnu sienas lipīdi ir mikolskābe, virknes faktors un D-vasks. Ja baktērijas būtu iekrāsotas, šūnas būtu grampozitīvas vai nedaudz bālas ar ļoti mazu krāsu.
Lai redzētu baktērijas, jāizmanto īpaši traipi, piemēram, Aumarine vai Zhiel-Neelson traipi.
Aumarīna-rodamīna traips
Procesā, izmantojot auramīna-rodamīnu, izmanto dzeltenu fluorescējošu krāsu, lai vizualizētu mikobaktēriju tuberkulozi zem fluorescences mikroskopa. Kā kontrasta krāsu var izmantot kālija permanganātu vai akridīna apelsīnu. Zem lēcas baktēriju šūnas parādīsies zaļas.
Auramīna-rodamīna krāsviela ir jutīgāka nekā Žils-Neelsons un ir ekonomiski izdevīgāka.
Ziehl-Neelson krāsošana
Ziehl-Neelson traipu izveidoja zinātnieki Franz Ziehl un Friedrich Neelsen, un tajā izmanto sildītu karbola-fuksīnu, augstu skābes spirta koncentrāciju un kontrastvielu, piemēram, zaļo malahītu vai metilēnzilo. Fluorescences mikroskopā baktēriju šūnas parādīsies spilgti rozā krāsā.
Ziehl-Neelson krāsviela ir izcilības standarts, lai sākotnēji identificētu tuberkulozes mikobaktērijas un mikobaktērijas leprae.
Agars
Sekundāri mikroskopijas noteikšanai mikobaktēriju tuberkuloze jāaudzē uz īpašas agara kultūras. Lowenstein-Jensen želatīnā ir sarežģītas organiskas vielas (piemēram, olas un kartupeļi), sāļi, glicerīns un zaļš malahīta (kas kavē citas baktērijas). Lai vēl vairāk nomāktu piesārņojošos mikroorganismus, var pievienot antibiotikas. Paraugu uzliek uz šī agara, un baktērijas aug trīs līdz deviņu nedēļu laikā.
Barības vielu kultūras šķīdumu, piemēram, albumīnu un biotīnu, var izmantot, lai atbalstītu pat vismazākā mērķa baktēriju augšanu. Tas ir pazīstams kā Middlebrook 7H9 (vai 7H12).
Abos medijos kolonijas parādīsies kā mazas, pulētas, gaiši brūnas kolonijas.
Izmantojot progresīvas tehnoloģijas, tagad mikobaktēriju tuberkulozi var audzēt, izmantojot automatizētu lasītāju. Šķidrumu Middlebrook 7H9 barotnes un fluorescējošu indikatoru savienojumu izmanto, lai uzraudzītu augšanu un ziņotu par pozitīvu vai negatīvu infekciju.